Imunohistochemická ( IHC ) je metoda lokalizace proteinů v buňkách tkáňového řezu, pro detekci antigenů pomocí protilátek .
Imunohistochemie využívá skutečnosti, že se protilátka specificky váže na antigeny v biologických tkáních. Protilátky mohou být polyklonálního nebo monoklonálního původu , přičemž monoklonální protilátky jsou v podstatě specifičtější.
Imunohistochemie odvozuje svůj název od kořene „imuno“, odkazující na protilátku použitou v postupu, od slova „ chemie “ a od slova „ histologie “, které odkazuje na studium biologických tkání (ve srovnání s imunocytochemií). ).
Pár protilátka-antigen lze vizualizovat několika způsoby. Ve většině případů je protilátka konjugována s enzymem (např. Peroxidázou ), který může katalyzovat reakci produkce barev ( např .: barvení imunoperoxidázou). Protilátky mohou být také značeny fluorochromem (např .: FITC , Rhodamin , Texas Red nebo Alexa Fluor): viz imunofluorescence .
Imunohistochemie je široce používána pro diagnostiku a / nebo monitorování rakoviny detekcí abnormálních buněk, jako jsou buňky nalezené v rakovinových nádorech.
Specifické markery jsou tak dnes známy pro různé druhy rakoviny:
Tyto molekulární markery jsou charakteristické pro určité buněčné události, jako je buněčná proliferace nebo smrt (apoptóza).
IHC je také široce používán v základním výzkumu k pochopení distribuce a lokalizace biomarkerů a proteinů odlišně exprimovaných v různých částech biologické tkáně.
Tkanina je umístěna na pevnou podložku. Protilátka se přidá do tkáňového přípravku, konkrétně se váže na protein, který má být v této tkáni detekován. Přidání primární protilátky spojené s detekčním systémem (enzym spojený s protilátkou, jehož přítomnost substrátu způsobí barevnou (peroxidázovou) nebo fluorescenční (rhodaminovou) reakci), což způsobí signál viditelný pouhým okem, nebo mikroskopie a spektrofotometrické techniky ano
Existují hlavně dvě metody týkající se imunohistochemie a detekce antigenů v biologických tkáních:
„Přímá metoda“ je metoda barvení v jednom kroku. Používá značenou protilátku (tj. Antisérum konjugované s FITC ), která reaguje přímo s antigeny přítomnými v tkáňových řezech. Protože se používá pouze jedna protilátka, postup je krátký a rychlý. Postrádá však citlivost kvůli nízkému zesílení signálu a od zavedení nepřímé metody se používá jen zřídka.
„Nepřímá metoda“ využívá neznačenou primární protilátku (první vrstvu), která reaguje s antigeny v tkáni, značenou sekundární protilátku (druhou vrstvu), která reaguje s primární protilátkou. Sekundární protilátka by měla být namířena proti imunoglobulinu G primární protilátky. Tato metoda vykazuje lepší citlivost díky amplifikaci signálu umožněné několika reakcemi sekundární protilátky na různých antigenních místech hlavní protilátky. Druhá vrstva protilátky může být značena fluorescenčním barvivem, jako je FITC, Rhodamin nebo Texas Red , které se nazývá metoda nepřímé imunofluorescence . Druhá vrstva protilátky může být také značena enzymem, jako je peroxidáza , alkalická fosfatáza nebo glukózaoxidáza . Tato druhá varianta se nazývá metoda nepřímého imunoenzymu . Poskytnutí substrátu pro tyto enzymy umožňuje stanovit přítomnost enzymu (a tedy protilátky) kvantifikovatelným způsobem.
Protilátka PEA3 se používá k hledání proteinu ETV4, který je exprimován ve velkém počtu v Ewingově sarkomu kulatých buněk.
Ewingův kulatý buněčný sarkom je velmi agresivní rakovina, která napadá hlavně kosti a měkké tkáně u poměrně mladých lidí. Je spojen s translokací * na úrovni genů CIC - DUX4, která způsobí nadměrnou expresi proteinu ETV4.
PEA3 je myší monoklonální protilátka *. To znamená, že myš byla injikována požadovaným lidským antigenem (ETV4) do Ewingova kulatého buněčného sarkomu, aby se vytvořila imunitní odpověď u myši a aby mohla produkovat protilátky, které budou použity pro imunohistochemii.
Čtení technického listuNejprve pro provedení reakce antigen / protilátka musí být voskovaná tkáň na sklíčku rehydratována. Takže proveďte opačné kroky, kdy jsme tkáň vložili do parafínu.