Pufr pro elektroforézu

Elektroforéza pufr nebo migrace pufr je vodivý pufr ( elektrolytů ), umístěné v elektroforetických nádržích zlepšit podmínky migrace molekul, které mají být odděleny v důsledku působení elektrického pole.

Vlastnosti

Pufry pro elektroforézu se používají hlavně v gelové elektroforéze k oddělení makromolekul, jako jsou biopolymery nukleových kyselin a proteinů . Gel se umístí do pufru pro horizontální gelovou elektroforézu nebo alespoň na obou koncích gelu pro vertikální gelovou elektroforézu. Elektroforetický pufr obsahuje disociované ionty ve vodném roztoku. Zvyšují elektrickou vodivost roztoku. Iontová síla v pufru pro elektroforézu určuje mobility iontů, rychlost migrace a topné podmínky gelu.

Protein

Typické iontové páry pufru používané při čištění proteinů elektroforézou jsou uvedeny v následující tabulce.

Buffer pH Složení
Tris-glycin (TGS nebo Laemmliho pufr) 8,3 - 8,8 Tris (25 mM), glycin (192 mM) a SDS (0,1% w / v).
Tris-tricin 8.24 TRIS (50 mM), tricin (50 mM), EDTA (1 mM) a SDS (0,1% m / v)
Tris-MOPS 7.7 TRIS (50 mM), MOPS (50 mM), EDTA (1 mM) a SDS (0,1% m / v)
Tris-MES 7.3 TRIS (50 mM), MES (50 mM), EDTA (1 mM) a SDS (0,1% m / v)

Tyto pufry se používají například k provádění elektroforézy na polyakrylamidovém gelu v přítomnosti dodecylsulfátu sodného (SDS-PAGE).

Nukleové kyseliny

Při separaci nukleových kyselin lze použít pufry uvedené v následující tabulce.

Buffer pH Složení
TAE 8.0 Tris, kyselina octová a EDTA (1 mM)
TBE 8.0 Tris, kyselina boritá a EDTA (1 mM)
TPE Tris (89 mM), kyselina fosforečná (1,3% w / v) a EDTA (2 mM)
SB 8.0 Hydroxid sodný a kyselina boritá
LB Hydroxid lithný a kyselina boritá

Tyto pufry se používají například pro provádění elektroforézy na agarózovém gelu a kapilární elektroforézy .

Reference

  1. Elektroforéza proteinů a nukleových kyselin
  2. H. Schägger: Tricin-SDS-STRÁNKA. In: Nature protocols. Pásmo 1, Nummer 1, 2006, S. 16–22, DOI : 10.1038 / nprot.2006.4 , PMID 17406207 .
  3. Hermann Schägger, Gebhard von Jagow: Elektroforéza na gelu tricin -dodecylsulfát-polyakrylamidový gel pro separaci proteinů v rozmezí od 1 do 100 kDa. In: Analytical Biochemistry . Bd. 166, 1987, S. 368–379, DOI : 10,1016 / 0003-2697 (87) 90587-2 , PMID 2449095 .
  4. Lela Buckingham: Molekulární diagnostika. FA Davis, 2011, ( ISBN  978-0-803-62975-2 ) . S. 95.