Elektroforéza proteinů (nebo protein ), je způsob analýzy směsi proteinů pomocí gelové elektroforézy . Spoléhá se na schopnost nabitých proteinů migrovat póry gelu, když je aplikován elektrický proud. Používá se v proteomice i v medicíně , hlavně z krevního séra ( krevní plazma není vhodná).
Elektroforéza je chemická analýza technika masy molekul . Pokud budeme řídit jemnou pórovitost gelu , molekuly migrují na opačný elektrický pól svého náboje v závislosti na jejich velikosti.
Tyto proteiny jsou molekuly, amfoterní (které nesou kladné a záporné náboje se nacházejí na bočních řetězců aminokyselin). Přijímají charakteristické trojrozměrné struktury a určité náboje mohou být vystaveny na povrchu molekuly, stejně jako mohou být pohřbeny v srdci molekuly. Srovnávací analýza molekulárních hmot bude proto provedena na proteinech denaturovaných jejich terciárními a sekundárními strukturami. Aniontový detergent pokrývá denaturované polymerní řetězce a dodává jim náboj (konstantní náboj / poměr aminokyselina-aminokyselina). Různé proteiny komplexní směsi jsou proto pokryty „pláštěm“ negativních nábojů.
Když se mezi konce gelu, kde byla uložena komplexní směs proteinů, aplikuje kontinuální napětí, proteiny migrují okmi, které tvoří gel. Síťky gelu udrží méně malých molekul, které pak budou mít největší migraci. Delší molekuly budou o to více zadrženy mezi oky gelu a budou mít nižší relativní migraci.
K odhalení migrace proteinů se používají různé metody. Nejběžnějším je specifické barvení proteinů. Gel je zbarvený a vykazuje elektroforetický profil, který ukazuje pásy, jejichž intenzita částečně odpovídá množství ve směsi a jejichž poloha odráží relativní molekulovou hmotnost. Tato molekulová hmotnost je srovnávána s komerčními standardy kalibrovanými v jednotkách proteinové hmoty ( Dalton ).
Proteinogram je elektroforéza sérových proteinů . Jedná se o časté a levné lékařské vyšetření. Je předkládán ve formě grafu, obsahující pět frakcí: albumin , alfa 1 - globuliny , α 2 -globulins, beta-globuliny a gama-globulinů.
Plazmy není vhodný pro tuto recenzi, protože obsahuje včetně fibrinogenu , která narušuje výsledky. Stejně tak je hemolyzované sérum zdrojem chyby při interpretaci, protože přítomnost hemoglobinu modifikuje stopu.
To je největší podíl (kolem 60%). Je homogenní a čistý (obsahuje pouze albumin ). Zdvojnásobení píku při elektroforéze naznačuje bisalbuminemii. Pokles této frakce odrážející hypoalbuminemii je pozorován u jaterní cirhózy nebo nefrotického syndromu .
Klíčové proteiny : α 1 antitrypsin a orosomukoid (také nazývané α 1 -kyseliny glykoprotein)
Tato frakce představuje přibližně 3%. S poklesem je podezření na jaterní cirhózu nebo nefrotický syndrom, zatímco zvýšení naznačuje zánětlivý syndrom .
Key Protein: haptoglobin je α 2 makroglobulin a ceruloplasmin
Tato oblast představuje asi 10% proteinogramu. Snižuje se během jaterní cirhózy a zvyšuje se během zánětlivého nebo nefrotického syndromu (bílkoviny v této oblasti jsou nadměrně produkovány, aby kompenzovaly ztrátu onkotického tlaku způsobenou únikem albuminu. Nefrotický syndrom proto usuzujeme, pouze pokud je snížena zóna Alb ).
Klíčové proteiny: fibrinogen (malý vliv na profilu), transferrin , tím C3 frakce z komplementu a IgA
Podíl β-globulinů představuje přibližně 11%. Jeho nárůst je pozorován během nefrotického syndromu. Tvorba „můstku“ mezi frakcemi β a γ je typická pro jaterní cirhózu.
Klíčové proteiny: imunoglobulinu G, M, D a E
Představující přibližně 17%. Snížení této oblasti znamená hypogamaglobulinemii nebo nefrotický syndrom. Naopak nárůst s úzkým vrcholem signalizuje monoklonální gamapatii . Zvýšení kopule odhaluje polyklonální hypergamaglobulinemii.