Corynebacterium diphtheriae

Corynebacterium diphtheriae Corynebacterium
diphtheriae Klasifikace

Panování	Bakterie
Větev	Aktinobakterie
Objednat	Actinomycetales
Rodina	Corynebacteriaceae
Druh	Corynebacterium

Druh

Corynebacterium diphtheriae
( Kruse , 1886 ) Lehmann & Neumann , 1896

Nižší poddruh

• Corynebacterium diphtheriae bv. vylezl
• Corynebacterium diphtheriae bv. intermedius
• Corynebacterium diphtheriae bv. belfanti
• Corynebacterium diphtheriae bv. mitis

Corynebacterium diphtheriae jepatogenní bakterie odpovědné za záškrt , nazývaná také Klebs-Loeffler bacil , protože byl objeven v roce 1884 ze strany německých bacteriologists Edwin Klebs (1834-1913) a Friedrich Loeffler (1852-1915).

V řečtině:

• bakterion = hůl
• coryne = klub
• záškrt = kůže, membrána.

Morfologické znaky

C. diphtheriae je grampozitivní fakultativně anaerobní organismus charakterizovaný nezapouzdřenými, nesporulovanými, nepohyblivými, přímými nebo zakřivenými tyčinkami ( bacily ) o délce 1–8 µm a šířce 0,3 × 0,8  μm , uspořádanými do palisád a do písmen V , s často oteklými konci, často zrnité barvy. Tyčinky tvoří v kultuře rozvětvené shluky (připomínající „čínská písmena“). Je to přísně parazitický mikroorganismus člověka. Produkuje exotoxin proteinové povahy 62 kDaltons , odpovědný za příznaky záškrtu. Inaktivace tohoto toxinu antisérem ( anatoxin ) je základem očkování proti záškrtu.

Biochemické znaky

C. diphtheriae nemá pyrazinamidázu. Biovar C.diphtheriae intermedius je pouze lipofilní biovar .

• Corynebacterium diphtheriae biovar gravis: dusičnan +, glykogen -;
• Corynebacterium diphtheriae biovar belfanti: dusičnan -, glykogen -;
• Cvarnebacterium diphtheriae biovar mitis: dusičnan +, glykogen -.

Ekologie

Je to bakterie přenášená z člověka na člověka slinnými částicemi pacientů nebo nositeli bakterií (v období epidemie to může být 3 až 5%). Je relativně odolný ve venkovním prostředí.

Patogenita

Záškrt je pseudomembranózní angina pectoris : je to koagulovaný serofibrinózní exsudát ulpívající na podkladových tkáních. Angina je obvykle oboustranná. Nástup je zákeřný, objevuje se po inkubaci 2 až 5 dnů. Nosu je obvykle také infikován (ale izolován nosní záškrtu je vzácnější a méně závažné). Vzácnější jsou záškrt zvukovodu nebo záškrt kožní rány (zejména tropický).

K úmrtí při záškrtu mohou vést dva mechanismy:

• záď znamená, že rozšíření pseudomembranózní infekce hrtanu , kde smrt udušením. Časté na počátku XX -tého  století (all GP měl ve svém hardwaru sady provést tracheotomii domů), tato komplikace je dnes vzácné: Aktuální laryngitida obstruents případ ( „záď“) jsou spíše způsobeno buď Haemophilus influenzae nebo Myxovirus parainfluenzou, nebo oslabená forma bacilu Klebs-Loeffler nebo Bordetella Pertussinum vektor černého kašle, který dává záď (reference: Merck Manual Centennial edition). Byly hlášeny případy pseudomembranózní anginy C. haemolyticum, což naznačuje další taxonomii Corynebacterium diphteriae , kterou je Klebs-Loefflerův bacil;
• toxin , jehož hlavním cílem orgány jsou myokardu a nadledvinky . Letální dávka pro člověka je přibližně 0,02  mg .

C. diphtheriae je toxigenní bakterie , množí se v nosohltanu, kde vylučuje exotoxin. Ten s působením lokalizovaným do nosohltanu způsobuje pseudomembranózní záškrtovou anginu . Falešná membrána způsobuje obstrukci nosohltanu a smrt z udušení. Když toxin difunduje do krve, dostane se do srdce , ledvin a centrálního nervového systému a způsobí paralýzu .

Epidemiologie

Epidemiologie je očividně ovlivněna očkováním  : v každé komunitě, kde je očkováno alespoň 75% členů, se záškrt stává vzácným nebo dokonce mizí. Úmrtnost (5–10%) je ovlivněna rychlostí diagnostiky a léčby.

Bakteriologické vlastnosti

Morfologie

Rozměry: 3 až 8 mikronů o 0,5 až 1,0 mikronu. Pseudodiphtheria jsou často kratší (plus nebo minus 1 až 2 mikrony) a podsaditý; jejich zbarvení je méně zrnité (! Tyto rozdíly jsou pouze relativní).

Kultura

Vývoj není na obvyklých médiích příliš charakteristický.

Toxin

• Antigenicky identický protein, bez ohledu na produkující kmen. Je to protein s molekulovou hmotností kolem 72 kDa .
• To inhibuje syntézu proteinů v inaktivaci transferázu z aminokyselin na ribozomy savčích buněk (bakteriální ribozómy jsou necitlivé). Nejcitlivější jsou buňky myokardu a nadledvin . Kromě toho, v 10% případů, pozdní paralýza ( 10 th až 30 th  den), reverzibilní, obecně velmi závažné (omezen na hltanu a okohybných svalů), může být pozorována .
• Schopnost vytvářet tento toxin závisí na přítomnosti bakteriofága . Netoxigenní kmen se stává, pokud je lyzogenizován tímto fágem, nazývaným „beta fág“.
• In vitro , nad nebo pod optimální koncentrací železa 100 g / ml, dochází k malé nebo žádné produkci toxinu. Pokud je železa více, molekuly tohoto proteinu se s ním spojí a vytvoří cytochrom b , který je netoxický. Toxin by proto byl protein vstupující do složení cytochromu, jehož syntéza zůstává neúplná kvůli nedostatku železa.

Diagnostické metody

Jelikož existuje praktická zajímavost sérologické reakce, diagnóza je založena na objevu bacilu ve výrobku k výtěru z krku a / nebo nosu (nosní je obzvláště důležitý pro hledání nositelů choroboplodných zárodků nebo u pacientů, jejichž hrdlo je částečně dezinfikováno antiseptickými nebo antibiotickými pastilkami, ale tyto vzorky by měly být přednostně odebrány před podáním antibiotik. Pokud jde o záškrt vyvolaný Klebs bacillus-Loeffler, důrazně se doporučuje Elekův test. Diagnóza: Záškrt musí být systematicky vyvoláván před falešná angina pectoris nebo pseudomembranózní subakutní ulcerace kůže. Diagnóza záškrtu je jednou z mimořádných událostí mikrobiologické laboratoře. izolace se provádí z výtěrů nasofaryngeálních vzorků, membrán nebo vzorků kůže. Z těchto vzorků, které jsou nejčastěji polymikrobiální, izolace podezřelých kolonií vyžaduje selektivní médium. Všechny korynebakterie komplexu záškrtu izolované mikrobiologickými laboratořemi musí být naléhavě odeslány do CNR des Corynebacterérie za účelem hledání genu pro toxin a identifikace druhu. Tváří v tvář podezření na záškrt musí být současně zaslán vzorek falešných membrán do CNR. Pro bakteriologické potvrzení záškrtu musí být CNR informována a obdržet klinické a epidemiologické informace - pobyt v zahraničí, profese, stav očkování, kontakt s jedním nebo více zvířaty  atd.  - shromážděno během úvodní zprávy. Odeslání CNR by nemělo zpozdit urgentní zahájení léčby tváří v tvář jakémukoli klinickému podezření na záškrt.

Metody:

• izolace / identifikace + výzkum toxinogeneze (gen tox + produkce in vitro (Elek)) + antibiogram;
• vzorky séra od pacienta musí být získány před každou séroterapií (sérová banka a odeslání do CNR). Stanovení titru antitoxinové protilátky proti záškrtu umožňuje určit, v závislosti na stavu očkování, zda izolované bakterie exprimovaly toxin.

Léčba: Séroterapie se podává neprodleně, pokud se toxické příznaky projeví ještě před potvrzením přítomnosti genu kódujícího toxin záškrtu (tox +), aby se toxin co nejrychleji neutralizoval (požádejte o dočasné povolení pro nominální použití ATU).

Antibiotická léčba se upraví podle antibiogramu: intramuskulární penicilin G podle hmotnosti, spojený s pyostacinem a erythromycinem. Délka léčby 21 dní. nebo méně efektivní

Amoxicilin 3  g denně u dospělých ve třech dávkách (orálně nebo i.v.), makrolidy v případě alergií na beta-laktamy. Doba léčby po dobu 14 dnů s výjimkou azitrhomycinu po dobu tří dnů (způsoby odkazují na zprávu HCSP 2011). Zkontrolujte negativitu vzorků hrdla (nebo kůže) léčených na D15 a D16 (D7 a D8 pro azithromycin) kvůli možnému časnému relapsu po léčbě.

Mikroskopické vyšetření

Neúčinné z hlediska záškrtu je však nutné u jakéhokoli výtěru z anginy pectoris provést Gramův nátěr k detekci možné přítomnosti fuso-spirilární asociace Vincenta .

Kultura

Veškerá výtěrová angina bude naočkována na krevní agar pro detekci Streptococcus beta-hemolytikum. Detekce záškrtu bacil je založena na použití následujících 2 médií:

• koagulované sérum: médium Loeffler obsahující 3/4 a 1/4 hovězího sérového vývaru koaguluje při 80  ° C . Toto médium není ve skutečnosti selektivní, ale korynebakterie se tam vyvíjejí mnohem rychleji (12 až 18 hodin) než u ostatních choroboplodných zárodků a navíc je nejtypičtější morfologie bakterie Diphtheria bacillus v přípravcích vyrobených ze sraženého séra. Je tedy prostředkem pro rychlou, ale předpokládanou diagnózu, protože „podezřelý“ zárodek musí být izolován a odlišen od pseudodifterie, která trvá několik dní;
• krevní doplněném teluritu (0.02²%), které jsou selektivnější, ale pomalejší (36 až 48 hodin). Difterický bacil vytváří černé kolonie (redukce teluritu), drsné nebo hladké v závislosti na kmeni. Ale pseudodifterie a stafylokoky mohou také růst na těchto médiích, což vede k vzniku černých kolonií: podezřelé kolonie proto musí být subkultivovány a identifikovány. Kromě biochemických charakteristik je možné určit, zda je kmen producentem toxinu. Tento výzkum lze provést in vivo: intradermální inokulace morčat nebo králíků (infiltrace a nekróza ) nebo subkutánní injekce morčat (letální účinek), kontrolní zvíře je chráněno anti-difterickým sérem. Toxin lze také odhalit in vitro metodou Elek  : inokulace kmenů, které mají být testovány, v paralelních pruzích na agaru proužkem savého papíru impregnovaného antitoxinem umístěným kolmo na semena: imunodifúzí se vytvoří linie srážení průnik toxigenních kmenů s antitoxinem.

Očkování

Preventivní očkování je v mnoha zemích povinné.

Léčba

Léčebná léčba musí zahrnovat především antitoxickou seroterapii. To bude o to účinnější, čím dříve bude podáván. Úmrtnost na záškrt je

• 0% v případě, že sérum vstříknutí 1 st  den
• 4%, pokud je sérum injikováno 2 e  den
• 11%, pokud je sérum injikováno 3 e  den
• 17%, je-li v séru vstříknutí 4 th  den
• 20%, je-li v séru vstříknutí 5 th  den nebo mimo ni.

Antibiotika hrají při léčbě pouze doplňkovou roli. Jejich hlavním nástrojem je urychlení vymizení zárodku u jedinců, kteří po zotavení zůstávají nositeli zárodků.

Difterický toxin

Difterický toxin je pantropický exotoxin (bez buněčné specificity ) o velikosti 58 k Da složený ze 3 podjednotek:

• řetězec T: translokační doména;
• řetězec C: katalytická doména;
• doména R řetězec: buněčný receptor.

Způsob působení toxinu je schematicky znázorněn na obrázku 1:

1. vazba R domény na její membránový receptor;
2. internalizace komplexu toxin-receptor a tvorba endosomu;
3. interakce T domény s membránou endosomu , poté pod vlivem pH endosomu translokace toxinu a uvolnění C domény v cytoplazmě;
4. působení domény C působením ADP-ribosylace. Blokuje elongační faktor (EF-2), který transformuje GTP na GDP (pohyb ribozomů na messenger RNA ) působením na komplex EF-2-ADP-ribozom.

Poznámky:

1. C. pseudotuberculosis a C.ulcerans mohou také chovat prophage β a stát se toxigenními;
2. některé kmeny netoxinogenních C. diphtheriae (tox-) mohou určovat angíny , záněty vedlejších nosních dutin, které mohou být komplikovány septikemií , artritidou , endokarditidou ...

Citlivost na antibiotika

Bakterie jsou citlivé na většinu antibiotik , jako jsou peniciliny , ampicilin , cefalosporiny , chinolony , chloramfenikol , tetracykliny , cefuroxim a trimethoprim .

Poznámky a odkazy

1. H. Barbier a G. Ulmann, Bacteriologie: nový bakteriologický a klinický výzkum, profylaxe a léčba , Éditions J.-B. Baillière
2. E.Pilly 17 th  Edition, strana 342